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Abfragung Wuchereria bancrofti L3 der Larven in den Moskitos: Ein RückTranscri… In Verbindung stehende Artikel

Abfragung Wuchereria bancrofti L3 der Larven in den Moskitos: Eine RückTranscriptase PCR-Proben-auswerteninfektion und eine Ansteckungsfähigkeit.

PLoS Negl Trop DIS. 2010; 4 (2): e602

Autoren: Laney SJ, Ramzy RM, Helmy HH, Farid ha, Ashour AA, Weil GJ, Williams SA

HINTERGRUND: Abfragung von filarial DNA in den Moskitos durch PCR kann ansteckende Moskitos von angesteckten Moskitos nicht unterscheiden. Um Übertragung auszuwerten riskieren Sie eine Probe ist erforderlich dass ansteckende Parasiten des Stadiums spezifisch entdecken kann L3. Wir berichten jetzt über die Entwicklung einer Probe, die spezifisch das ansteckende Stadium von Wuchereria bancrofti in den Moskitos entdeckt. Die Probe entdeckt eine L3-activated mRNA Abschrift durch Rück-transcriptase PCR (RT-PCR). METHODOLOGY/PRINCIPAL ENTDECKUNGEN: W. bancrofti Häutchen-in Verbindung stehende Gene wurden unter Verwendung der Bioinformatik ausgewählt und rasterten als mögliche Diagnosezielgene für Abfragung L3 in den Moskitos. Nach der Speicherung auf angestecktem Blut Ausdruckprofile waren unter Verwendung RT-PCR auf der RNS entschlossen, die von den Moskitos lokalisiert wurde, die täglich über einem zweiwöchigen Zeitraum gesammelt wurden. Herkömmliches Multiplex RT-PCR und Echtzeitproben des multiplexes RT-PCR wurden unter Verwendung einer L3-activated cuticlin Abschrift für Abfragung L3 und einer aufbauend ausgedrückten Abschrift, tph-1, für „Irgendeinstadium“ Abfragung entwickelt. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: Diese Probe kann verwendet werden, um W. bancrofti ansteckende Stadiumslarven und „Irgendeinstadium“ Larven in vereinigten vektormoskitos gleichzeitig zu entdecken. Dieser Test kann nützlich sein, während ein Hilfsmittel für das Festsetzen im Übertragungspotential im Rahmen der Filariasisbeseitigungsprogramme ändert.

PMID: 20169115 [PubMed - im Prozess]

Hiv-Verschmutzung der Handels-PCR-Enzyme wirft den Wert der Qualitätskontrolle der preiswerten internen genotypischen HIV-Drogewiderstandtests auf.

Antivir dort. 2010; 15 (1): 121-6

Autoren: Monleau M, Plantier JC, Peeters M

HINTERGRUND: Preiswerte interne Technologien für genotypische Drogewiderstand-Prüfungsgebrauchreagenzien mit Qualitätskennsätzen für nur Forschung. Hier berichten wir über die Resultate der PCR-Verstärkungen in den Negativsteuerungen, die in zwei unabhängigen Labors beobachtet wurden. METHODEN: Positive PCR-Verstärkungen der Protease und der Rücktranscriptase Fragmente für genotypische Drogewiderstandprüfung von HIV auf Punkten des getrockneten Bluts und/oder des Plasmas wurden auf Negativsteuerung Proben beobachtet und wurden im Detail durch PCR und Reihenfolge und phylogenetische Analysen analysiert, um den Ursprung der PCR-Verschmutzung zu identifizierenen. RESULTATE: Ausführliche Analyse deckte auf, dass die RT-PCR Enzyme mit einem HIV-gegründeten Vektor verschmutzt wurden, der von der gleichen Firma in den Handel gebracht wurde. ZUSAMMENFASSUNGEN: Diese Beobachtungen zeigen die Notwendigkeit, Qualitätskontrollejobsteps einzuführen, die für das Fehlen HIV in den neuen Reagensstapel überprüfen, weil dieser molekulare Diagnose von HIV und von genotypischen Drogewiderstandtests unter Verwendung der internen Protokolle erheblich kompromittieren kann.

PMID: 20167998 [PubMed - im Prozess]

Neues Misch-format Echtzeit-PCR-Probe, zum des konferierenden Widerstands der Veränderungen zu den Triazolen im Kolbenschimmel fumigatus und im Vorherrschen des Multitriazol Widerstands unter klinischen Isolaten in den Niederlanden zu entdecken.

J Antimicrob Chemother. 18. Februar 2010;

Autoren: Klaassen CH, de Valk HA, Curfs-Breuker IM, Meis JF

Lernziele das Ziel dieser Studie waren: (i) das Vorherrschen der Triazol-beständigen Kolbenschimmel fumigatus Isolate in den Niederlanden studieren; und (ii) schnelle Istzeit PCR-Methoden konzipieren, umso zu identifizierenen Isolate. Methoden A neues Misch-format wird Echtzeit-PCR-Probe für die Abfragung der Veränderungen beschrieben, die zu Triazolwiderstand im A. fumigatus führen. Ein Set PCR-Zündkapseln und eine Prüfspitze, die einen einzelnen Leuchtstoffkennsatz im Verbindung mit einer double-stranded DNA-Leuchtstofffärbung trägt, erlauben simultaner Abfragung (a) der spezifischen Veränderungen sowie das verstärkte dieses Produkt Aufschläge als interne Verstärkungssteuerung. Die Methode wurde an einer gelegentlichen Ansammlung von 209 klinischen Isolaten in von den Niederlanden angewendet und wurde mit phänotypischer Anfälligkeitprüfung verglichen. Resultiert insgesamt vier Triazol-beständige Isolate wurden identifizierent, mit dem Ergebnis eines Vorherrschens der beständigen Isolate von <2%. Alle vier Isolate enthielten eine identische Kombination der Veränderungen, die zu Multitriazol Widerstand führen, wie durch andere vorher berichtet. Molekulare Testergebnisse waren 100%, das mit phänotypischer Anfälligkeitprüfung übereinstimmend ist. Zusammenfassungen, obgleich in den spezifischen geduldigen Bevölkerungen das Vorherrschen des Widerstands im A. fumigatus ein auftauchendes Problem sein kann, in der breiten Bevölkerung ist sie noch verhältnismäßig niedrig. Das neue Istzeit PCR-Format erlaubt schnelles und zuverlässiges Kennzeichen von so Isolate.

PMID: 20167588 [PubMed - wie vom Verleger angegeben]

Kennzeichen der Koagulase-negativen Staphylokokken lokalisiert von den schafartigen Milchproben durch PCR-RFLP rRNA 16S und Abstandsder gene.

TierarztMicrobiol. 28. Januar 2010;

Autoren: Onni T, Sanna G, Cubeddu GP, Marogna G, Lollai S, Leori G, Tola S

Das Kennzeichen der Koagulase-negativen Staphylokokken (CNS) schafartige Infektion verursachend bleibt problematisch, obgleich dieses Bakterium als die ätiologischen hauptsächlichmittel der subklinischen Brustdrüsenentzündung in den Schafen und in den Ziegen gilt. In dieser Studie wurden 226 CNS-Isolate von 2201 Melksardaschafen gesammelt, die 15 Mengen mit hohen Zählimpulskerben der körperlichen Zelle gehören. Alle Isolate wurden Kennzeichen mit dem API-Staphylo-Identifikation-Test und dann der Verstärkung der StaphylokokkenrRNA 16S und Abstandsgene durch PCR-Proben unterworfen. Das Abstandsgen wurde Beschränkungsfragmentlängen-Polymorphieanalyse mit dem Beschränkung Endonuclease AluI unterworfen, während das rRNA 16S Gen ribosomalem Fingerabdruck mit den Beschränkung Endonucleases RsaI, PstI und AluI unterworfen wurde. Als PCR-RFLP Muster der CNS-Isolate zu denen ihrer Bezugsbelastungen unterschiedlich waren, wurden Abstandsgen amplicons für endgültiges Kennzeichen sequenziell geordnet. Der API-Staphylo-Identifikation-Test, in der Alternative zur genotypischen Kennzeichenmethode, lieferte beträchtlich verschiedene Resultate in den Sorten ausgedrückt, die innerhalb jeder Gruppe identifizierent wurden. Unter Verwendung der PCR-RFLP Probe bündelten die meisten Isolaten zusammen mit dem Typen Belastung (131 der Staphylokokkeepidermidis, entsprechend bis 57.9%), folgten von den S. caprae (34, entsprechend bis 15%) und von den S. chromogenes (30, entsprechend bis 13.2%). Als schlußfolgerung ist die PCR-RFLP Probe von rRNA 16S und die Abstandsgene eine zuverlässigere und reproduzierbarere Methode als der API-Staphylo-Identifikation-Test für das Kennzeichen von CNS Schafbrustdrüsenentzündung verursachend.

PMID: 20167442 [PubMed - wie vom Verleger angegeben]

Förderermethylierunganalyse von O6-methylguanine-DNA methyltransferase im glioblastoma: Abfragung durch verschlossenen auf Säure basierenden quantitativen NUKLEINPCR unter Verwendung eines geprägten Gens (SNURF) als Referenz.

BMC Krebs. 18. Februar 2010; 10 (1): 48

Autoren: Morandi L, Franceschi E, De Biase D, Marucci G, Tosoni A, Ermani M, Pession A, Tallini G, Brandes AA

AUSZUG: HINTERGRUND: Das epigenetische Zum Schweigen bringen des MGMT Gens durch Förderermethylierung bezieht sich auf Verlust des MGMT Ausdrucks, der verminderten DNA-Reparatur Aktivität und des längeren Gesamtüberlebens bei Patienten mit glioblastoma, das, zusätzlich zur Strahlentherapie, alkylierenchemotherapie mit carmustine oder temozolomide empfing. Wir beschreiben und validieren eine schnelle Methylierung empfindliche quantitative PCR-Probe (Frau-qLNAPCR) unter Verwendung der verschlossenen geänderten Zündkapseln der Nukleinsäure (LNA) und eines geprägten Gens als Referenz. METHODEN: Eine Analyse wurde von einer Datenbank von 159 GBM Patienten gebildet, die zwischen April 2004 und Oktober 2008 gefolgt wurden. Nach Bisulfitbehandlung, methyliertem und unmethylated CpGs wurden durch LNA Zündkapseln und molekulare Leuchtfeuerprüfspitzen erkannt. Der SNURF Förderer eines geprägten Gens bildete auf 15q12, wurde verwendet als Referenz ab. Diese Annäherung wurde verwendet, weil geprägte Gene eine ausgeglichene Exemplaranzahl von methylierten und unmethylated Allelen haben, und dieses Merkmal erlaubt eine einfache und exakte Normalisierung. RESULTATE: Übereinstimmung zwischen bereits beschriebenem verschachteltem MS-PCR und Frau-qLNAPCR wurde in 158 von 159 Proben (99.4%) gefunden. Die Frau-qLNAPCR Probe stellte dar, dass eine PCR-Leistungsfähigkeit von 102% und eine Empfindlichkeit von 0.01% für LNA Zündkapseln änderten, während unveränderte Zündkapseln niedrigere Leistungsfähigkeit (69%) und niedrigere Empfindlichkeit (0.1%) aufdeckten. MGMT Förderer wurde gefunden, unter Verwendung der Frau-qLNAPCR bei 70 Patienten (44.02%) methyliert zu werden, und in 89 Proben (55.97%) vollständig unmethylated. Mittleres Gesamtüberleben lag bei 24 Monaten und war 20 Monate und 6 Monate, bei Patienten mit unmethylated und methyliertem MGMT, beziehungsweise. Die Berücksichtigung von MGMT Methylierungdaten stellte von der Frau-qLNAPCR als binäre Variable zur Verfügung, war Gesamtüberleben zwischen Patienten mit den GBM Proben unterschiedlich, die den unmethylated MGMT Förderer beherbergen und anderen Patienten mit jedem möglichem Prozentsatz der MGMT Methylierung (p=0.003). Dieser Unterschied wurde unter Verwendung anderen abgeschnittene Werte für MGMT Methylierungkinetik (d.h. 10% und 20% des methylierten Allels) beibehalten, während der Unterschied verloren war, als 50% des MGMT methylierten Allels als Sperre verwendet wurde. ZUSAMMENFASSUNGEN: Wir berichten und validieren klinisch über ein genaues, robustes und kosteneffektives Frau-qLNAPCR Protokoll für die Abfragung und die Quantifikation der methylierten MGMT Allele in den GBM Proben. Unter Verwendung der Frau-qLNAPCR zeigen wir, dass sogar niedrige Niveaus der MGMT Förderermethylierung berücksichtigt werden müssen, um Antwort zur Temozolomidechemotherapie vorauszusagen.

PMID: 20167086 [PubMed - wie vom Verleger angegeben]

Pcr-Verstärkung und hohe Auflösung schmelzen Kurvenanalyse als schnelle Diagnosemethode zu den Genotypusbauteilen des Mykobakterium avium-intracellulare Komplexes.

Clin Microbiol stecken an. 17. Februar 2010;

Autoren: Castellanos E, Aranaz A, De Buck J

Einige der Bauteile des Mykobakterium avium-intracellulare (MAI) Komplexes werden als menschliche Krankheitserreger bei den immunocompromised und immunocompetent Patienten erkannt. Die aktuellen molekularen Methoden, die für Genotypus die MAI-komplizierten Bauteile vorhanden sind, können teuer und technisch fordernd sein. In diesem Report beschreiben wir zum ersten Mal die Anwendung eines Echtzeit-PCR und hohen der Auflösungschmelzannäherung, um zwischen den komplizierten Bauteilen zu unterscheiden, indem wir ein Bauteil der EVP-(Pro-Pro-Glu) Genfamilie, MACPPE24 zielen. In diesem Ziel wurden Bezugsbelastungen der Mykobakterium avium Unterart und des Mykobakterium intracellulare (M. intracellulare) verwendet, um die Technik zu optimieren. Dann wurde diese Echtzeit-PCR-HRM Annäherung verwendet, um 10 Mykobakterium avium Unterart hominissuis Feldisolate von der M. intracellulare Bezugsbelastung zu unterscheiden.

PMID: 20167007 [PubMed - wie vom Verleger angegeben]

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